maya89
2010-03-31, 17:59
1. Anticorps :
Un anticorps est une protéine (http://fr.wikipedia.org/wiki/Prot%C3%A9ine) complexe utilisée par le système immunitaire (http://fr.wikipedia.org/wiki/Syst%C3%A8me_immunitaire) pour détecter et neutraliser les antigènes (http://fr.wikipedia.org/wiki/Antig%C3%A8ne) de manière spécifique. Les anticorps sont sécrétés par des cellules dérivées des lymphocytes B (http://fr.wikipedia.org/wiki/Lymphocyte_B) : les plasmocytes (http://fr.wikipedia.org/wiki/Plasmocyte).
Les anticorps constituent l'immunoglobuline (http://fr.wikipedia.org/wiki/Immunoglobuline) principale du sang, aussi on utilise parfois le terme immunoglobuline à la place du mot anticorps, mais cet emploi est abusif.
Dans le cas de maladies auto-immunes (http://fr.wikipedia.org/wiki/Maladies_auto-immunes), on parle d'auto-anticorps.
1. L'obtention des anticorps :
A l'heure actuelle, seuls les lymphocytes de vertébrés sont capables de produire des anticorps. Toutefois, au repos, l'animal produit peu d'anticorps. Pour qu'il produise les anticorps dirigés contre une molécule, il est nécessaire de la lui présenter. La première étape consiste donc à purifier cette molécule. Tant que cette première étape n'est pas achevée, il n'y a pas d'obtention d'anticorps possibles.
2. Rôle des anticorps :
Au cours de la réponse immunitaire, les anticorps ont trois fonctions principales : se lier à l'antigène, activer le système du complément et recruter des cellules immunocompétentes.
Anticorps monoclonaux et polyclonaux
· Un agent pathogène (bactérie (http://fr.wikipedia.org/wiki/Bact%C3%A9rie), virus (http://fr.wikipedia.org/wiki/Virus), etc.) est reconnu par le système immunitaire par l'intermédiaire d'antigènes (http://fr.wikipedia.org/wiki/Antig%C3%A8ne). Un antigène possède généralement plusieurs épitopes (http://fr.wikipedia.org/wiki/%C3%89pitope) différents qui sont autant de sites de liaison aux anticorps. On peut classer une population d'anticorps selon sa capacité à reconnaître un seul ou plusieurs épitopes. On parle alors respectivement d'anticorps monoclonaux et polyclonaux.
3. Anticorps monoclonaux
Figure 1: Anticorps monoclonaux,
liaison à un épitope spécifique
Les anticorps monoclonaux sont des anticorps ne reconnaissant qu'un seul type d'épitope (http://fr.wikipedia.org/wiki/%C3%89pitope)sur un antigène donné (voir figure 3). Ils sont par définition tous identiques et produits par un seul clone de plasmocyte (http://fr.wikipedia.org/wiki/Plasmocyte).
Les anticorps monoclonaux sont très largement utilisés en biologie (http://fr.wikipedia.org/wiki/Biologie) et en médecine (http://fr.wikipedia.org/wiki/M%C3%A9decine), à la fois comme outils de diagnostic (http://fr.wikipedia.org/wiki/Diagnostic_(m%C3%A9decine)) et dans des buts thérapeutiques (http://fr.wikipedia.org/wiki/Th%C3%A9rapeutique). Les anticorps monoclonaux utilisés comme médicaments ont tous une DCI (http://fr.wikipedia.org/wiki/D%C3%A9nomination_commune_internationale) se terminant par « mab », acronyme de « monoclonal antibody » comme par exemple le rituximab (http://fr.wikipedia.org/wiki/Rituximab). Ils sont par exemple utilisés dans les tests de grossesse (http://fr.wikipedia.org/wiki/Test_de_grossesse) du commerce, ainsi que dans de nombreux domaines de la recherche (http://fr.wikipedia.org/wiki/Recherche)en biologie (http://fr.wikipedia.org/wiki/Biologie) et par de nombreuses techniques (cytométrie en flux (http://fr.wikipedia.org/wiki/Cytom%C3%A9trie_en_flux), western blots (http://fr.wikipedia.org/wiki/Western_blot)...). Ils sont aussi de plus en plus utilisés dans les tests en laboratoire d'immuno-hématologie pour rehausser les réactions positives
v Production des anticorps monoclonaux :
Le génie génétique (http://fr.wikipedia.org/wiki/G%C3%A9nie_g%C3%A9n%C3%A9tique) permet aujourd'hui de produire des anticorps monoclonaux utilisables en pratique clinique humaine. Mais la plupart des anticorps étant produits dans des cellules de rongeurs (http://fr.wikipedia.org/wiki/Rongeur) (souris (http://fr.wikipedia.org/wiki/Souris), rat (http://fr.wikipedia.org/wiki/Rat), hamster (http://fr.wikipedia.org/wiki/Hamster), lapin (http://fr.wikipedia.org/wiki/Lapin) plus rarement poulet (http://fr.wikipedia.org/wiki/Poulet), Mulet (http://fr.wikipedia.org/wiki/Mulet)), ils déclenchent une réaction immunitaire lors de leur injection à un patient. Les anticorps monoclonaux sont un ensemble d'anticorps tous identiques, qui ne reconnaissent qu'un seul antigène. Ils proviennent d'un clone de lymphocytes B (les cellules qui fabriquent les anticorps), c'est-à-dire d'un groupe de cellules issues d'un lymphocyte B unique.La fabrication d'anticorps monoclonaux passe par l'obtention d'un lymphocyte B spécifique d'un antigène donné, capable de se multiplier à l'infini. Pour cela, on prélève les lymphocytes B de la rate d'une souris à laquelle on a au préalable injecté l'antigène en
question. On fusionne ensuite ces lymphocytes avec des cellules de myélome (une forme de cancer des lymphocytes), qui ont la capacité de se diviser sans limite. Parmi les cellules hybrides obtenues, appelées hybridomes, on sélectionne celle qui fabrique les anticorps recherchés. L'hybridome sélectionné est ensuite multiplié : soit par culture cellulaire, soit en l'injectant à une souris, qui va alors développer des myélomes producteurs de grandes quantités d'anticorps monoclonaux.
4. Anticorps polyclonaux :
Les anticorps polyclonaux sont un mélange d'anticorps reconnaissant différents épitopes (http://fr.wikipedia.org/wiki/%C3%89pitope) sur un antigène donné, chaque idiotype étant sécrété par un clone de plasmocyte différent. Au cours de la réponse immunitaire, un organisme synthétise des anticorps dirigés contre plusieurs épitopes (http://fr.wikipedia.org/wiki/%C3%89pitope) d'un antigène : la réponse est dite polyclonale. In vivo, la réponse est toujours polyclonale, sauf cas exceptionnels (vaccination (http://fr.wikipedia.org/wiki/Vaccination) par exemple). Cet exemple est en fait un exemple d'anticorps polyclonal monospécifique qui est en fait un anticorps qui reconnaît différents épitopes (http://fr.wikipedia.org/wiki/%C3%89pitope) du même antigène alors qu'un anticorps polyclonal reconnaît les épitopes (http://fr.wikipedia.org/wiki/%C3%89pitope) de différents antigènes.
v Obtention d’anticorps polyclonaux :
Les techniques utilisées en immunologie
A. Obtention d'anticorps polyclonaux :
La réaction biologique obtenue par immunisation d'un animal entier (cheval, chèvre ou mouton, lapin) permet d'obtenir plusieurs clones de lymphocytes B (ou T).
Le taux d'anticorps obtenu peut être accru par recours à l'adjuvant de Freund. L'adjuvant dit "complet" est un mélange d'huile minérale et de mycobactéries tuées qui génère une réaction inflammatoire avec granulome. L'adjuvant dit "incomplet" ne comporte que de l'huile minérale. Ceci freine la diffusion de l'Ag prisonnier dans l'huile, produisant un effet retard. Cet adjuvant n'est pas utilisé chez l'homme car il provoque des réactions articulaires.
Après un ou deux rappels nécessaires à l'obtention d'une quantité suffisante d'anticorps, on réalise une saignée. Le sérum - on parle plus volontiers d’antisérum - contient :
o des anticorps spécifiques de l'Ag issus de différents Lymphocytes B reconnaissant plus ou moins efficacement plusieurs épitopes de l’antigène (anticorps polyclonaux) ;
o d'autres anticorps de l'animal.
B. Purification des anticorps :
La purification des anticorps obtenus se réalise par purification par chromatographie d'affinité : les anticorps en solution sont filtrés sur une colonne de résine, gel ou billes portant l'Ag fixé ; les Ig spécifiques de cet Ag sont retenues puis décrochées par des tampons.
C. Avantage et inconvénients des anticorps polyclonaux :
Avantage de ces sérums : reconnaissance des Ag par différents épitopes générant un signal plus fort pour le marquage car une molécule d'Ag fixe différents anticorps.
Inconvénient essentiel : des réactions croisées sont possibles.
5. La difference entre les anticorps polyclonaux et monoclonaux :
· Les anticorps polyclonaux sont issue de la purification d'anticorps plasmatiques suite a une immunisation, il y a donc un ensemble d'anticorps qui reconnaissent l'antigène d'où le terme polyclonaux = plusieurs clones.
· pour les anticorps monoclonaux ils sont constituer d'un seul type d'anticorps soient issues du génie génétique (on les fait produire par des cultures cellulaires) ou soit issue de la sélection clonale de plasmocytes qui produisent donc un seul type d'anticorps
· Les monoclonaux sont un anticorps bien défini, produit a partir d'un clone unique de cellule-B.
· Les polyclonaux sont différents anticorps produits pas différentes cellules-B, qui reconnaissent le même antigène.
Un anticorps est une protéine (http://fr.wikipedia.org/wiki/Prot%C3%A9ine) complexe utilisée par le système immunitaire (http://fr.wikipedia.org/wiki/Syst%C3%A8me_immunitaire) pour détecter et neutraliser les antigènes (http://fr.wikipedia.org/wiki/Antig%C3%A8ne) de manière spécifique. Les anticorps sont sécrétés par des cellules dérivées des lymphocytes B (http://fr.wikipedia.org/wiki/Lymphocyte_B) : les plasmocytes (http://fr.wikipedia.org/wiki/Plasmocyte).
Les anticorps constituent l'immunoglobuline (http://fr.wikipedia.org/wiki/Immunoglobuline) principale du sang, aussi on utilise parfois le terme immunoglobuline à la place du mot anticorps, mais cet emploi est abusif.
Dans le cas de maladies auto-immunes (http://fr.wikipedia.org/wiki/Maladies_auto-immunes), on parle d'auto-anticorps.
1. L'obtention des anticorps :
A l'heure actuelle, seuls les lymphocytes de vertébrés sont capables de produire des anticorps. Toutefois, au repos, l'animal produit peu d'anticorps. Pour qu'il produise les anticorps dirigés contre une molécule, il est nécessaire de la lui présenter. La première étape consiste donc à purifier cette molécule. Tant que cette première étape n'est pas achevée, il n'y a pas d'obtention d'anticorps possibles.
2. Rôle des anticorps :
Au cours de la réponse immunitaire, les anticorps ont trois fonctions principales : se lier à l'antigène, activer le système du complément et recruter des cellules immunocompétentes.
Anticorps monoclonaux et polyclonaux
· Un agent pathogène (bactérie (http://fr.wikipedia.org/wiki/Bact%C3%A9rie), virus (http://fr.wikipedia.org/wiki/Virus), etc.) est reconnu par le système immunitaire par l'intermédiaire d'antigènes (http://fr.wikipedia.org/wiki/Antig%C3%A8ne). Un antigène possède généralement plusieurs épitopes (http://fr.wikipedia.org/wiki/%C3%89pitope) différents qui sont autant de sites de liaison aux anticorps. On peut classer une population d'anticorps selon sa capacité à reconnaître un seul ou plusieurs épitopes. On parle alors respectivement d'anticorps monoclonaux et polyclonaux.
3. Anticorps monoclonaux
Figure 1: Anticorps monoclonaux,
liaison à un épitope spécifique
Les anticorps monoclonaux sont des anticorps ne reconnaissant qu'un seul type d'épitope (http://fr.wikipedia.org/wiki/%C3%89pitope)sur un antigène donné (voir figure 3). Ils sont par définition tous identiques et produits par un seul clone de plasmocyte (http://fr.wikipedia.org/wiki/Plasmocyte).
Les anticorps monoclonaux sont très largement utilisés en biologie (http://fr.wikipedia.org/wiki/Biologie) et en médecine (http://fr.wikipedia.org/wiki/M%C3%A9decine), à la fois comme outils de diagnostic (http://fr.wikipedia.org/wiki/Diagnostic_(m%C3%A9decine)) et dans des buts thérapeutiques (http://fr.wikipedia.org/wiki/Th%C3%A9rapeutique). Les anticorps monoclonaux utilisés comme médicaments ont tous une DCI (http://fr.wikipedia.org/wiki/D%C3%A9nomination_commune_internationale) se terminant par « mab », acronyme de « monoclonal antibody » comme par exemple le rituximab (http://fr.wikipedia.org/wiki/Rituximab). Ils sont par exemple utilisés dans les tests de grossesse (http://fr.wikipedia.org/wiki/Test_de_grossesse) du commerce, ainsi que dans de nombreux domaines de la recherche (http://fr.wikipedia.org/wiki/Recherche)en biologie (http://fr.wikipedia.org/wiki/Biologie) et par de nombreuses techniques (cytométrie en flux (http://fr.wikipedia.org/wiki/Cytom%C3%A9trie_en_flux), western blots (http://fr.wikipedia.org/wiki/Western_blot)...). Ils sont aussi de plus en plus utilisés dans les tests en laboratoire d'immuno-hématologie pour rehausser les réactions positives
v Production des anticorps monoclonaux :
Le génie génétique (http://fr.wikipedia.org/wiki/G%C3%A9nie_g%C3%A9n%C3%A9tique) permet aujourd'hui de produire des anticorps monoclonaux utilisables en pratique clinique humaine. Mais la plupart des anticorps étant produits dans des cellules de rongeurs (http://fr.wikipedia.org/wiki/Rongeur) (souris (http://fr.wikipedia.org/wiki/Souris), rat (http://fr.wikipedia.org/wiki/Rat), hamster (http://fr.wikipedia.org/wiki/Hamster), lapin (http://fr.wikipedia.org/wiki/Lapin) plus rarement poulet (http://fr.wikipedia.org/wiki/Poulet), Mulet (http://fr.wikipedia.org/wiki/Mulet)), ils déclenchent une réaction immunitaire lors de leur injection à un patient. Les anticorps monoclonaux sont un ensemble d'anticorps tous identiques, qui ne reconnaissent qu'un seul antigène. Ils proviennent d'un clone de lymphocytes B (les cellules qui fabriquent les anticorps), c'est-à-dire d'un groupe de cellules issues d'un lymphocyte B unique.La fabrication d'anticorps monoclonaux passe par l'obtention d'un lymphocyte B spécifique d'un antigène donné, capable de se multiplier à l'infini. Pour cela, on prélève les lymphocytes B de la rate d'une souris à laquelle on a au préalable injecté l'antigène en
question. On fusionne ensuite ces lymphocytes avec des cellules de myélome (une forme de cancer des lymphocytes), qui ont la capacité de se diviser sans limite. Parmi les cellules hybrides obtenues, appelées hybridomes, on sélectionne celle qui fabrique les anticorps recherchés. L'hybridome sélectionné est ensuite multiplié : soit par culture cellulaire, soit en l'injectant à une souris, qui va alors développer des myélomes producteurs de grandes quantités d'anticorps monoclonaux.
4. Anticorps polyclonaux :
Les anticorps polyclonaux sont un mélange d'anticorps reconnaissant différents épitopes (http://fr.wikipedia.org/wiki/%C3%89pitope) sur un antigène donné, chaque idiotype étant sécrété par un clone de plasmocyte différent. Au cours de la réponse immunitaire, un organisme synthétise des anticorps dirigés contre plusieurs épitopes (http://fr.wikipedia.org/wiki/%C3%89pitope) d'un antigène : la réponse est dite polyclonale. In vivo, la réponse est toujours polyclonale, sauf cas exceptionnels (vaccination (http://fr.wikipedia.org/wiki/Vaccination) par exemple). Cet exemple est en fait un exemple d'anticorps polyclonal monospécifique qui est en fait un anticorps qui reconnaît différents épitopes (http://fr.wikipedia.org/wiki/%C3%89pitope) du même antigène alors qu'un anticorps polyclonal reconnaît les épitopes (http://fr.wikipedia.org/wiki/%C3%89pitope) de différents antigènes.
v Obtention d’anticorps polyclonaux :
Les techniques utilisées en immunologie
A. Obtention d'anticorps polyclonaux :
La réaction biologique obtenue par immunisation d'un animal entier (cheval, chèvre ou mouton, lapin) permet d'obtenir plusieurs clones de lymphocytes B (ou T).
Le taux d'anticorps obtenu peut être accru par recours à l'adjuvant de Freund. L'adjuvant dit "complet" est un mélange d'huile minérale et de mycobactéries tuées qui génère une réaction inflammatoire avec granulome. L'adjuvant dit "incomplet" ne comporte que de l'huile minérale. Ceci freine la diffusion de l'Ag prisonnier dans l'huile, produisant un effet retard. Cet adjuvant n'est pas utilisé chez l'homme car il provoque des réactions articulaires.
Après un ou deux rappels nécessaires à l'obtention d'une quantité suffisante d'anticorps, on réalise une saignée. Le sérum - on parle plus volontiers d’antisérum - contient :
o des anticorps spécifiques de l'Ag issus de différents Lymphocytes B reconnaissant plus ou moins efficacement plusieurs épitopes de l’antigène (anticorps polyclonaux) ;
o d'autres anticorps de l'animal.
B. Purification des anticorps :
La purification des anticorps obtenus se réalise par purification par chromatographie d'affinité : les anticorps en solution sont filtrés sur une colonne de résine, gel ou billes portant l'Ag fixé ; les Ig spécifiques de cet Ag sont retenues puis décrochées par des tampons.
C. Avantage et inconvénients des anticorps polyclonaux :
Avantage de ces sérums : reconnaissance des Ag par différents épitopes générant un signal plus fort pour le marquage car une molécule d'Ag fixe différents anticorps.
Inconvénient essentiel : des réactions croisées sont possibles.
5. La difference entre les anticorps polyclonaux et monoclonaux :
· Les anticorps polyclonaux sont issue de la purification d'anticorps plasmatiques suite a une immunisation, il y a donc un ensemble d'anticorps qui reconnaissent l'antigène d'où le terme polyclonaux = plusieurs clones.
· pour les anticorps monoclonaux ils sont constituer d'un seul type d'anticorps soient issues du génie génétique (on les fait produire par des cultures cellulaires) ou soit issue de la sélection clonale de plasmocytes qui produisent donc un seul type d'anticorps
· Les monoclonaux sont un anticorps bien défini, produit a partir d'un clone unique de cellule-B.
· Les polyclonaux sont différents anticorps produits pas différentes cellules-B, qui reconnaissent le même antigène.