الزراعة داخل المختبر او culture in vitro

[آلاء الرحـــــــمن]

المشاركة الأصلية كتبت بواسطة *ابن القيم*

أين الجدول 1؟

ساضعه على شكل صورة في الرد القادم ريثما احضره لانه لا يمكن وضعه مباشرة شكرا لك على المتابعة

[آلاء الرحـــــــمن]

الجدول (1) بعض المحاليل الأم (غرام/لتر) المستخدمة في تحضير البيئات المختلفة في الإكثار الدقيق

(يستخدم 10 مل من كل محلول عند تحضير 1 لتر من البيئة)

[آلاء الرحـــــــمن]

مكونات معمل زراعة الأنسجة النباتية

Plant Tissue Culture Laboratory

تجرى زراعة الأنسجة النباتية تحت ظروف معقمة في معامل أو مختبرات خاصة تسمى (معامل أومختبرات زراعة الأنسجة) ويجب أن تتوافر فيها شروط معينة وأن تجهز تجهيزا خاصا ويجب أن يكون المعمل خالى من جميع الكائنات الدقيقة الملوثة وأن يكون بعيدا عن الأماكن والطرق المتربة والتي يمكن أن تلوث المزارع والبيئات. إن إنشاء معمل لزراعة الأنسجة يعتمد فى الأساس على نوعية وهدف الأبحاث والدراسات التى سوف تجرى داخل المعمل وكذلك الميزانية المعدة لإنشاء هذا العمل. بغض النظر عن نوع التقنية التى سوف تستخدم داخل المعمل إن كان الهدف منها على سبيل المثال إكثار النباتات أو إنتاج المركبات الثانوية أو إجراء تجارب التحسين الوراثى ونقل الجينات الهامة إلى النبات فلابد من توافر الركائز الأساسية للمعمل والتى تشتمل على ما يأتى:
1- مكان للغسيل والتخزين.
2- مكان لإعداد البيئة وتعقيمها وتخزينها.
3- غرفة لإجراء عمليات التعقيم والزراعة.
4- غرفة للنمو مزودة بنظام للتحكم فى الحرارة والضوء والرطوبة.
5- غرفة لإجراء عملية الملاحظة على النتائج.

ونستعرض هذه المكونات كالآتى:

1- غرفة الغسيل ومخزن للأدواتWashing and Storage Room
يجب أن تشمل غرفة الغسيل مكان متسع به أحواض ذات صرف جيد مصنعة من الرصاص لمقاومة الأحماض والقلويات التى تستخدم داخل المعمل ومزودة بمصدر للمياه الساخنة والباردة فضلاً على وجود مناضدعمل يوضع عليها جهاز التقطير المزدوج Duble distilled water . غسالة أطباق، أحواض بلاستيكية وإستانلس لإجراء عملية النقع والشطف بها، مجفف هوائى وفرش للغسيل، يجب أن تكون الغرفة مزودة بجهاز شفط للأتربة لحماية الأدوات المغسولة من التلوث مرة أخرى. وسوف نقدم هنا أحد الرسومات الهندسية لمعمل زراعة الأنسجة

.
- غرفة إعداد البيئات الغذائية والتعقيم 1- طاولة للمعمل 2- مكان جهاز التعقيم 3- حمام مائى 4- فرن للتعقيم الجاف
- غرفةغسيل 1- طاولة معمل 2- حوض مزدوج للغسيل

3- مكان لمواد الغسيل وفرش الغسيل 4-مكان للتجفيف الهوائى مثل الأرفف 5- مكان لفرن التجفيف.

C- غرفة مظلمة للتصوير 1- طاولة للعمل 2- ثلاجة وديب فريزر 3 - حوض للغسيل.
D-غرفة لتخزين الكيماويات والزجاجات.
E- غرفة الزراعة والنقل 1-الهود وهو جهاز منقى للهواء ويستخدم للزراعة وهو مزود بجهاز أشعة فوق بنفسجية تستخدم للتعقيم.
F- غرف مزودة بنظام للتحكم فى الحرارة والإضاءة وكذلك الفترة الضوئية. 1-جهاز رج 2- أرفف للزراعة.
G- المعمل الرئيسى مزود بكل من طاولات معمل ومكاتب 1- مكان للميكروسكوب 2-عدة موازين ومنها مايقيس حتى (3-4 أرقام عشرية) 3- سخان ذو مقلب مغناطيسى 4- جهاز قياس الأس الأيدروجينى 5- مكان للأدوات المعملية 6- جهاز تقطير مياه مزدوج 7- مكان اتصال بين أ ، ب
H- مكان لعمليات الأقلمة والنقل خارج المعمل مزود بجهاز تحكم للحرارة والضوء والرطوبة.

[آلاء الرحـــــــمن]

وفيما يلى بعض الأدوات الموجودة فى غرفة الغسيل ومخزن للأدوات:
أ - الأدوات الزجاجية
يجب أن تكون الأدوات الزجاجية من النوع المقاوم للحرارة (بيركس) ويكون أفضل إذا كانت غير قابلة للكسر أو الخدش. الطريقة المثلى لغسيل الأدوات الزجاجية عن طريق النقع فى محلول Sodium dichromat-sulphoric acidالصوديوم داى كرومات حامض الكبريتيك لمدة 4 ساعات على الأقل ونظراً لخطورة حامض الكبريتيك على الجلد والعيون فإنه يستخدم الآن المحاليل المطهرة مثل (الكلوراكس) لمدة 16 ساعة نقع ثم تؤخذ الزجاجات وتشطف تحت ماء جارى من الصنبور ثم يعاد الشطف فى ماء مقطر. إذا كان الغسيل ميكانيكياً فى إحدى غسالات الأطباق فالأوعية الزجاجية تعامل بالمطهر على درجة 70 °م لمدة 5 – 10 دقائق. ولمزيد من النظافة تنقع فى ماء ساخن لمدة 5 دقائق أخرى. ثم تشطف بواسطة ماء منزوع منه الأيونات المعدنية لمدة 3 دقائق ثم تشطف نهائياً بواسطة ماء مقطر.ولتجفيف الأدوات الزجاجة توضع الأوعية الزجاجية فى فرن ذات درجات حرارة عالية أو أى مجفف هوائى ساخن وفى بعض الأحيان يوجد بعض من آجار البيئة ملتصق فى بعض الأوعية فلابد من إزالته بالماء الساخن أو وضعة فى جهاز التعقيم لإجراء عملية سيولة للآجار قبل المعاملة بالمطهرات.
ب- الأدوات البلاستيكية
بدأ فى الفترة الأخيرة إستخدام العديد من الأدوات البلاستيكية فى معامل زراعة الأنسجة تكون معقمة بالأشعة من إنتاج العديد من الشركات مثل (فالكون, كورننج., نال جين ونال جية ) وهذه الأدوات تكون الاستخدام مرة واحدة فقط ثم تعدم ولكن مع إرتفاع أسعار البلاستيك ظهر الإحتياج إلى إنتاج أدوات بلاستيكية يمكن إستخدامها أكثر من مرة. هذه الأدوات يجب أن تشطف بواسطة أحد المطهرات متوسطة القوة وتنقع بعد ذلك فى الماء الساخن ثم فى الماء المقطر المعقم وتختلف الخطوات المستخدمة فى الغسيل طبقاً لنوع وإستخدام الأدوات البلاستيكية ولكن تراعى الخطوات التالية لغسيلها:
1- تشطف بإحدى المذيبات العضوية مثل الكحول – الأسيتون – الكلورفورم ولا تستخدم هذه مع البولى أكليرك).
2- تغلى فى محلول بيكربونات الصوديوم وهذه المعاملة لا ينصح باستخدامها مع الأدوات المصنعة من البولى إيثلين أو الأكليرك.
3- تنقع فى محلول بيكربونات الصوديوم لمدة 4 ساعات على الأقل.
4- تنقع بعد ذلك فى محلول حامض الأيدروكلوريك واحد عيارى لمدة 8 ساعات ثم فى محلول حامض النتريك لمدة 3 ساعات أخرى ثم تشطف بعد ذلك بواسطة ماء مقطر ثم تجفف وتحفظ بعيداً عن الأتربة.
2- غرفة إعداد البيئات الغذائية Media Preparation Room
إن مكان إعداد البيئة الغذائية يجب أن يكون به الإستعدادات والفراغات اللازمة لتخزين الكيماويات و أدوات وأوعية الزراعة وكل الأدوات اللازمة لإعداد البيئة الغذائية مثل جهاز تسخين بمقلب – ميزان حساس - دوارق – كاسات – ماصات – جهاز قياس الأس الأيدروجينى pH حمام مائى - موقد بنزن مزودة بالغاز، فرن ميكروويف – جهاز تعقيم أوتوكلاف أو حلة طهى ذات ضغط عالى أو حلل عادية لطبخ وإعداد البيئة الغذائية وهناك أجهزة ضرورية مثل الثلاجات وجهاز رج - جهاز شفط أو تفريغ وذلك لتفريغ البيئة من الهواء - جهاز تجميد.
3- غرفة الزراعة Culture Room
يمكن إجراء تقنيات زراعة الأنسجة بنجاح فى مكان نظيف وجاف عند إتخاذ جميع الإحتياطات اللازمة لمنع دخول أى ملوثات إلى الأدوات المستخدمة فى الزراعة. إن أبسط الطرق فى معامل زراعة الأنسجة هو إستخدام صندوق بلاستيك مغلق ومطهر جيداً بواسطة إستخدام الأشعة فوق البنفسجية. على أن تطهر أرضية الصندوق باستخدام كحول إيثانول 95% وأيضاً يمكن إستخدام صندوق خشبى أو ما يطلق عليه (الهود) وله باب أمان من البلاستيك أو الزجاج يمكن فتحه وقفله ويجب أن يكون الباب مزود بمانعة للأتربة ستارة هوائية. ولأداء العمل داخل الهود يقوم الأخصائى بإدخال يديه داخل الهود ويؤدى العمل المطلوب منه مع مراعاة تعقيم يديه بالكحول قبل إدخالها إلى مكان العمل داخل الهود وبطبيعة الحال فانة من الباب الزجاجى يمكنه مشاهدة ما يجريه داخل الهود. ويمكن إستخدام الهود فى العمليات القليلة ولكن له سعة محدودة. وعند تقدم العمل فى زراعة الأنسجة والاحتياج إلى إجراء العديد من الأعمال داخل الهود ظهرت فى الأسواق أنواع أخرى منه. أمكن إستخدام غرفة كبيرة معقمة بواسطة الـ UV بحيث يدخلها هواء منقى من الأتربة بواسطة مجموعة من الفلاتر مثل فلتر HEPAحيث تصل كفاءته من 99.97 إلى 99 ,99% وهذه تقوم بعدم السماح للأتربة والكائنات الدقيقة بالنفاذ منه وهو يستخدم فى معظم معامل زراعة الأنسجة وهو ما يطلق عليه (الهود) Laminar airflow وهو عبارة عن جهاز مزود بواسطة موتور صغير يدفع الهواء فى أحد الفلاتر التى تحجز الأتربة العالقة الكبيرة الحجم ثم بعد ذلك يمر الهواء إلى فلتر دقيق HEPA (ميكرون) 0.3 μ والهواء إما يدفع رأسياً أو أفقياً فى منطقة العمل (الهواء القادم من منطقة الفلاتر يكون خالياً من الأتربة والبكتريا والفطريات) وسرعته حوالى 27 ± 3م/ دقيقة وهذه السرعة قادرة على إزاحة أى مصدر للتلوث الخارجى من أوراق أو شعر أو أتربة عن منطقة العمل داخل الكابينة.
وهذا النوع من الكبائن متوفر بأسعار مختلفة وأحجام مختلفة يختار الباحث منها ما يناسب حجم العمل وسعة المكان الذى يعمل به وتيار الهواء داخل الكابينة لا يؤثر على موقد البنزين أو مصدر اللهب بها حيث السرعة المعتدلة للهواء المدفوع. وفى حالة المناطق الحارة والشبه حارة والجو الترابى ينصح باستخدام هذه الكابينة فى غرف ذات أبواب مزدوجة وذلك لإطالة عمر الفلاتر وممنوع منعاً قاطعاً أن تواجه الكابينة باب أو شباك فى الغرفة.
وكابينة زراعـة الأنسجة النباتية (الهود) تستخدم كمكان معقم لزراعة الأنسجة والأعضاء النباتية في الأوانى سواء (الزجاجية أو البلاستيكية المحتوية على البيئة المعقمة) ويجهز في الهود موقد بنزن أو موقد كحول (سبرتاية) ومشارط وملاقط معقمة وتحتوى كذلك حجرة الزراعة على تروللى وأسبتة لنقل الأوانى الزجاجية التي زرعت إلي غرفة الحضانة ويوجد بابان لغرفة الزراعة أو ستارة هوائية للإقلال بقدر الإمكان من التلوث ويـفضل الدخول في هذه الحجرة للأشخاص القائمين بالعمل فقط وذلك للإقلال من التلوث بقدر الإمكان.
وفي هذه الحجرة يوجد بعض الحوامل الرأسية التي تحتوى على بعض الأرفف أو ترابيزة وذلك لوضع الأوعية المحتوية على البيئة والأوعية المحتوية على نباتات لإكثارها وكذلك الأوعية التي تحتوى على الماء المقطر المعقم الذى يستخدم في غسيل الأجزاء النباتية بعد عملية النقع في هيبوكلوريت الصوديوم (الكلوروكس) أو كحول الإيثانول.

[آلاء الرحـــــــمن]

- غرفة التحضين Incubation Room
تؤثر العوامل البيئية كثيراً على عملية نمو المزارع وكذلك تكشفها ولذلك فإن جميع أنواع مزارع الأنسجة تحفظ فى مكان يمكن التحكم بداخله فى درجة الحرارة والضوء والرطوبة ودورة الهواء. إن مزارع البروتوبلاست أو المتوك والمزارع السائلة أكثر حاجة لظروف التحكم عن مزارع الكالوسات ولذلك يجب أن يوضع برنامج لدرجات الحرارة والإضاءة على مدار 24 ساعة.
عموماً درجة الحرارة المثلى لنمو الكالوسات والمزارع . أما عن درجات الإضاءة وطول الفترة الضوئية فإنها تتباين حسب النبات النامى فى الغرفة وتنظيم فترة العمل عن طريق إستخدام ساعة أو منظم ميقاتى لذلك الغرض. وأغلب النباتات تنمو فى ضوء خافت لا تزيد قوته عن واحد كيلو لوكس والبعض يحتاج الى كثافة ضوئية عالية 5الى10 كيلو لوكس وأحياناً تتطلب بعض المزارع النمو فى إظلام تام. وعموماً فإن هذه العملية يمكن التحكم فيها من وقت لآخر حسب الغرض من البحث ونوع المزرعة النامية والنبات النامى.
أما النسبة المئوية للرطوبة داخل غرف النمو فإنها تتباين من 20 – 98% ويمكن التحكم فيها عن طريق أجهزة التحكم فى الرطوبة. وبالنسبة لأرفف النمو داخل الغرفة قد تكون من الزجاج أو من الخشب وكل رف مزود بوحدة إضاءة مستقلة عن الآخر وأحياناً توضع مروحة صغيرة على أحد جوانب الرف حتى يتم تنظيم توزيع الحرارة التى قد تنبعث عند استخدام وحدات الإضاءة ومن المفضل إستخدام وحدات إضاءة بيضاء باردة فلورسنت لا تصدر أى حرارة عند استخدامها أو أقل حرارة ممكنة من النوع Cool White وتوضع أوعية الزراعة إما مباشرة على الأرفف أو توضع فى صوانى إما بلاستيكية أو من الألومنيوم لسهولة النقل والتعامل معها داخل المعمل.
فى العادة توضع ورقة على أوعية الزراعة متضمنة بعض المعلومات الأساسية مثل نوع التجربة وتاريخ الزراعة ونوع النبات والمعاملة الغذائية التى بداخله. أحياناً تستخدم حضانات نمو كبيرة الحجم وفى داخل هذه الحضانات يمكن التحكم فيها أفضل من غرف النمو المجهزة. لابد من توفر مواصفات خاصة فى حضانات النمو. إن انقطاع التيار الكهربائى وهذا وارد قد يؤدى إلى توقف أوموت الخلايا خاصة النامية فى المزارع السائلة على أجهزة الرج ولذلك لابد من توفر مولد كهربائى إحتياطى يعمل بمجرد فصل التيار الكهربائى الأساسى عن المعمل.
قد تكون حضانات كهربائية مجهزة بالظروف البيئة المطلوبة لزراعة الأنسجة وبها أرفف تتحكم في إضاءتها ودرجة حرارتها بقدر الإمكان. وقد تكون حجرة نظيفة معقمة بقدر الإمكان يوجد بها Stands وهي عبارة عن حوامل رأسية يوجد بها أرفف مضاءة ومزودة بجهاز لضبط الوقتTimer (لضبط فترة الإضاءة) وهي غالبا 16 ساعة إضاءة و 8 ساعات إظلام وتحتوى هذه الحجرة على أجهزة تكييف لضبط درجة الحرارة المطلوبة بقدر الإمكان وكذلك جهازLux meter لقياس الكثافة الضوئية كما تحتوى الحجرة أيضا على مرشحات هوائية وذلك لتجديد الهواء الداخلى للغرفة حيث أنها لايوجد بها شبابيك أو أي منافذ أخرى ماعدا باب واحد فقط لدخول وخروج النباتات والأشخاص. وال Stands عبارة عن أربعة حوامل رأسية من الألوميتال أو الحديد بطول5 و2-3 أمتار وبها من 3 - 5 أرفف بين الرف والآخر 40 - 50 سم وهي مضاءة بلمبات الفلورسنت.

5- غرفة الملاحظة وجمع المعلومات

Observation or Data collection Area

تجرى متابعة النموات داخل الدوارق إما فى غرفة النمو داخل الحضانات على فترات متقاربة متساوية حيث إنه يجب أن تكون المتابعة فى نفس ظروف النمو ولذلك تفحص المزارع إما فى غرفة النمو أو فى الكابينة الهوائية المعقمة أو أى منطقة معقمة صالحة لتجديد ونقل المزارع بالنسبة للفحص الميكروسكوبى يمكن أن تأخذ المزارع إلى حيث يوجد الميكروسكوب. النباتات الناتجة من الكالوسات أو من مزارع الأنسجة تنقل بعد ذلك إلى أصص صغيرة تحتوى على تربة صناعية مثل البيت موس والفيرموكوليت مكونة من عدة عناصر وتوضع فى غرفة النمو ثم تنقل إلى الصوبة الزجاجية بعد ذلك مع دوام الفحص الدورى لها وتسجيل الملاحظات عن درجة الحرارة و

[آلاء الرحـــــــمن]

بعض الملاحظات الرئيسية عند الغسيل وإستعمال الزجاجات

داخل معمل زراعة الأنسجة

1- الأدوات التى تستخدم أكثر من مرة داخل معمل زراعة الأنسجة يجب أن تفرغ من البيئات الغذائية بعد الانتهاء من العمل مباشرة وتنقع فى الماء ولا يسمح أن تجف البيئات أو الأجار داخل الأوعية.
2- يجب أن تعزل الأدوات المستخدمة فى الكيماويات مثل المطهرات والمذيبات العضوية بعيداً عن الزجاجات المستخدمة فى الزراعة.
3- كل الأوعية التى حدث بها تلوث أو لاصقت أى من الملوثات يجب أن تعقم قبل الاستخدام مرة أخرى.
4- يجب إزالة أى ملصقات على الزجاجات أو أى بيانات بالحبر على أوانى الزراعة قبل الغسيل عن طريق إستخدام الأسيتون أو الكحول.
5- الآجار أو البيئة الموجودة داخل الأوعية بعد الزراعة يجب أن تجمع ويتخلص منها بسرعة من المعمل إن كان هناك ملوثات يجب أن يعقم هذا الآجار داخل الأوتوكلاف قبل التخلص منه.
6- الأغطية البلاستيكية يجب أن تنقع فى ماء مقطر ويحذر نقعها فى محاليل الصابون أو المطهرات الكيماوية.
7- الأوعية الزجاجية المستخدمة فى الزراعة يجب أن تعامل بمحلول حامضى لإزالة أى نوع من البروتينات على الجدر.
8- الأوعية الزجاجية المصنعة من السليكون يجب أن توضع منفصلة عن الأوعية الأخرى بالمعمل وغالباً ما تكون معلمة .
ما يجب مراعاته عند غسيل الأوعية الزجاجية:
1- يجب أن تنقع الأوعية الزجاجية فى أحد المطهرات ذات تركيز 5% لمدة ساعة على الأقل.
2- فى الغسيل الأوتوماتيكى لا توضع أى مطهرات وتبرمج الغسالات على أساس الشطف بالمياه العادية 5 مرات ثم بالماء المقطر مرة واحدة ويمكن أن تعامل الأدوات بالمحاليل المطهرة قبل وضعها فى الغسالة.
3- الأوعية الزجاجية الكبيرة الحجم التى لا يمكن إدخالها فى الغسالة يمكن أن تغسل خارجها عن طريق شطفها بماء الصنبور من 5 إلى 6 مرات ثم بماء مقطر مرة واحدة.
4- إذا لم تتوفر إمكانيات الغسيل الميكانيكى فإن أى طريقة باستخدام ماكينة ذات فرش مختلفة الأحجام تؤدى الغرض.
ما يجب مراعاته عند الغسيل بالأحماض:
1- يجب أن يرتدى الشخص الذى يقوم بالغسيل قناع للوجه وكذلك قفاز..
2- يجب أن يتم الغسيل بالأحماض ونقع الأدوات الزجاجية فى مكان مزود بآلة شفط للأبخرة.
3- يحذر إضافة الماء إلى الحامض وعند التخفيف يضاف الحامض إلى الماء.
4- يجب التخلص من بواقى الغسيل بالأحماض عند تحول المحلول إلى اللون الأسود.
الصفات العامة للحضانات أو غرف النمو:
1- درجات الحرارة بها تتراوح من 2-40 °م.
2- التحكم فى درجة الحرارة يجب أن يكون بمقدار ± 0.5°م.
3- يجب أن تكون ذات أمان بالنسبة للدرجة القصوى والدنيا من الحرارة
4- يجب أن يكون بها مسجل دائم لدرجات الحرارة.
5- أن تكون ذات قدرة على البرمجة لمدة 24ساعة بالنسبة للضوء والحرارة.
6- تتحمل أن يوضع بها إضاءة لأكثر من 10.000 لوكس.
7- نسبة الرطوبة بها تتراوح من 20 – 98%.
8- نسبة الرطوبة يكون التحكم فيها بمقدار ± 3%.
9- أن يكون بها موزع للهواء بانتظام.
10- أن يكون السعة الحجمية بمعدل 0.7 م3 لكل 0.5 م2 مساحة.

[أبوعبد اللّه 16]

السلام عليكم و رحمة الله
عفوا اختي
هناك مدارسة حول شرح متن ثلاث الاصول في قسم الاسلامي

لاني قد قرأت لك في احدى المشاركات انك مهتمة بالمدارسة
بالتوفيق لكم

[آلاء الرحـــــــمن]

المشاركة الأصلية كتبت بواسطة مٌحـ التواضع ــــب

السلام عليكم و رحمة الله
عفوا اختي
هناك مدارسة حول شرح متن ثلاث الاصول في قسم الاسلامي

لاني قد قرأت لك في احدى المشاركات انك مهتمة بالمدارسة
بالتوفيق لكم

شكرا لك اخي على التذكير جعلها الله في ميزان حسناتك

[آلاء الرحـــــــمن]

الخطوات المتبعة لزراعة الخلايا و الأنسجة النباتية:
أولا: إختيار الجزء النباتى:
1-إختيار نبات الأم Selective of mother plants
يجب أن يكون نبات الأم في حالة صحية جيدة وفي بداية نشاطه وذو صفات جيدة خالية من الأمراض خاصة الأمراض الفيرسية ويجب أن يكون قد خرج من طور الراحة إذا كان له طور راحة مثل الدرنات والأبصال.

2- إختيار الجزء الذى يزرع Selective of an explant
الأجزاء التي تستخدم هي القمم النامية للسيقان والجذور وأجزاء الزهرة وأجزاء من الثمار والبتلات والبذور وحبوب اللقاح والمتوك والمبيض والأجنة ونسيج النيوسيلة والإندوسبرم والفلقات والقشرة والنخاع والكمبيوم وهي الأجزاء المحتوية على مرستيمات أو أنسجة قابلة للتحول إلي الحالة المرستيمية ولكل نبات نسيج غالبا ما يكون أكثر ملائمة من غيرة. وهناك عدة إعتبارات من الواجب النظر اليها قبل إختيار الجزء الذى سيزرع وهي:
أ - الجزء النباتى المستخدم Explant
ويقصد به المنفصل النباتى (قمة نامية-قمة مرستيمية-جزء من الساق-جزء من الورقة-المتك.. الخ ).
ب - عمر المنفصل النباتى Age of Explant
عادة يفضل إستخدام المنفصل النباتى صغير السن وفي بعض الأحيان يفضل إجراء عملية التطويش لتكوين نموات حديثة أكثر نشاطا عند زراعتها ويمكن كذلك الحصول على النموات الحديثة القوية بإجراء عمليات التطعيم (الأصل الصغير بالطعم من النبات الكبير) وكذلك معاملة النباتات بالجبريلين وفي بعض الأحيان يستخدم مركبات السيتوكاينين حيث يشجع ذلك على تكوين النموات الحديثة.
ج - حجم المنفصل النباتى Size of Explant
لقد وجد أنة كلما زاد حجم المنفصل النباتى كانت نسبة النمو أعلى في معظم الحالات وكذلك يكون معدل التضاعف أعلى ولكن يعاب على هذه الطريقة أن نسبة التلوث تكون عالية وكذلك زيادة الإصابة الفيروسية - بينما في بعض الحالات يفضل أن يكون حجم المنفصل النباتى صغيرحتى يكون خالي من الأمراض وخاصة الأمـــراض الفيروسية وقليل التلوث. وقد وجد El-Shobaky (1991) - أن طول المرستيم (0.1-0.25 مم) أدت الى إنتاج نباتات خالية من الفيروس من نباتات مصابة من البطاطس.
د - موسم الحصول على المنفصل النباتى Season of Explant
تكون الأعضاء النامية أكثر نشاطا في بداية موسم النمو (فصل الربيع) عن بـقية فصول السنة.
هـ – نوعية وجودة مصدر النبات Quality of the Explant Source
يجب أن يكون مطابقا للأصل تماما وفي حالة نمو جيدة وخالي من الأمراض

[آلاء الرحـــــــمن]

ثانيا: عملية التعقيم و الزراعة للجزء النباتى: تعقيم الجزء المستعمل Sterilization of the Explant بعد الحصول على الجزء النباتى من مصدره الأمهات تجرى عليه عملية التعقيم كالآتى:
1) يغسل الجزء النباتى المستعمل تحت تيار من ماء الحنفية لمدة ساعة أو أكثر وهذه تقلل من نسب التلوث إلي درجة كبيرة وإذا كان السطح الخارجى مغطى بطبقة شمعية فإن غسيل الجزء المنفصل بإحدى مساحيق الغسيل يساعد على جعل السطح الخارجى أكثر قابلية للبلل.
2) يوضع في كحول إيثانول 70% لمدة نصف إلي واحد دقيقة ثم يغسل بالماء المقطر.
3) يوضع في هيبوكلوريت الصوديوم (الكلوروكس) 5 -20% لمدة ثلث ساعة مع الرج والتقليب المستمر.
4) يغسل بالماء المقطر المعقم 4-5 مرات للتخلص من آثار المادة المعقمة وبعدها يصبح الجزء النباتى قابل للزراعة. الخطوات من 2 حتى 4 تجرى داخل الهود.

-زراعة الجزء المستعمل على سطح البيئة Culture of the explant يتم زراعة النسيج المستعمل بعد تعقيمه على سطح البيئة المعقمة المحضرة سابقا باستخدام أدوات معقمة وهذه الزراعة تتم داخل هود معقم وهذا في حالة البيئة الصلبة أما اذا كانت البيئة سائلة فيوضع الجزء النباتى المستخدم على ركاب منغمس في البيئة ويسمى (قنطرة) وهي من ورق الترشيح الذى يتشرب المحاليل وينقلها إلي الجزء المنزرع. ويفضل أن تكون البيئة المستخدمة في المراحل الأولى صلبة وقد تكون سائلة في المراحل التالية. - تحضين المزارع Incubation of the cultures ويتم تحضين المزارع في حضانة أو في غرفة نمو Growth Chamber التي تحتوى على ال Stands وهذه تحتوى على أرفف مضاءة توضع عليها المزارع والعوامل البيئية اللازم توافرها عند زراعة الأنسجة وهي رطوبة مناسبة للمحافظة على الأنسجة من الجفاف ودرجة حرارة مناسبة وإحتياجات ضوئية مناسبة. الإحتياجات البيئية المطلوبة هي:
أ - الإحتياجات الضوئية Light requirement وتشتمل على:
1 - الكثافة الضوئية Light intensity تحتاج الأنسجة النباتية التي تم زراعتها في أوعية تحتوى على بـيئـة مغذية إلي ضوء لمساعدتها على نشأة وتخليق الأعضاء Initiation فالضوء ينظم عمليات التشكل Morphogenetic processes فهو يساعد على تكوين مبادئ الجذور والسوق وتخليق الأجنة النيوسيلية والأجنة الخضرية العرضية من نسيج الكالوس ولعل صعوبة تكشف الأعضاء في بعض الزراعات الغير ناجحة يرجع إلي عدم تعرضها لشدة الإضاءة المناسبة وقد لوحظ أن زراعة الأنسجة يلزمها التدرج في شدة الإضاءة من 1000 إلي 3000 لوكس وهناك بعض المزارع تحتاج إلي10000 لوكس. الكثافة الضوئية كانت مفيدة لإستطالة النباتات وزيادة عدد الأوراق وطول وعدد الجذور فى البطاطس (El-Shobaky 1991). 2 - الفترة الضوئية Photoperiod تحتاج معظم المزارع إلي 16 ساعة إضاءة و 8 ساعات إظلام وهناك البعض يحتاج إلى 12 ساعة إضاءة ومثلها إظلام وفي حالة الحصول على الميكروتيوبرز من البطاطس فإنها قد تحتاج إلي ضوء خافت أو إلي إظلام تام.

ب - الإحتياجات الحرارية Heat requirement في معظم الأحيان تكون درجة الحرارة 22 - 27م هي أنسب درجة لنمو مزراعة الأنسجة بالنسبة لنباتات المناطق المعتدلة إلا أنة في النباتات الإستوائية ونباتات المناطق الحارة يكون تكشف الأعضاء بصورة أفضل في درجات حرارة تتراوح ما بين 27 - 35م وقد وجد أن أفضل درجة حرارة للبراعم الخضرية على نبات الدخان كانت 18م. درجة الحرارة 20-25ºم كانت مناسبة لزيادة عدد الأفرع والأوراق وطول وعدد الجذور لنباتات البطاطس النامية فى أوعية الزراعة El-Shobaky (1991).

[أبو ماهر]

حاجة هائلة ومليحة

[Astana]

السلام عليكم و رحمة الله.
الاخوة الاكارم، هل من مختبر لزراعة انسجة الموز في الجزائر. ؟
شكرا

[kraouane]

ما شاء الله موضوع ثري